Новые липазы для ферментозаместительной терапии при экзокринной недостаточности поджелудочной железы

Экзокринная недостаточность поджелудочной железы, вызванная воспалением или опухолями поджелудочной железы, приводит к нарушению всасывания нутриентов в связи с недостатком пищеварительных ферментов. Несмотря на удовлетворительные результаты исследований современных видов ферментной терапии, нормализация процесса всасывания жиров у пациентов достигается редко.
Необходимо индивидуально подбирать терапию, включающую высокие дозы ферментов, использование кишечнорастворимой оболочки и добавление ингибиторов протонной помпы. Ключевая цель улучшения данного вида терапии — найти пищеварительные ферменты с высокой активностью и стабильностью в пищеварительном тракте.

МЕТОДЫ:

Мы клонировали и проанализировали три новые липазы, выделенные из инфузорий вида Tetrahymena thermophile. Используя высокоточное титрование с поддержанием pH (pH-STAT) и колориметрические методы, мы определили стабильность и липолитическую активность в физиологических условиях в сравнении с имеющимися в продаже препаратами пищеварительных ферментов свиного или грибкового происхождения. Мы проводили измерения при значениях pH от 2,0 до 9,0 с различными концентрациями солей желчных кислот и такими субстратами, как оливковое масло и жир, выделенный из рациона свиней.

РЕЗУЛЬТАТЫ:

Активность цилиарных липаз CL-120, CL-130 и CL-230 оказалась до 220 раз выше, чем у Креона, стандартного Панкреатина и ризолипазы Nortase при pH от 2,0 до 9,0. Эти липазы высокоактивны в присутствии желчных солей и сложных субстратов из рациона свиней, а также более стабильны после инкубации в желудочном соке человека, в сравнении со свиной панкреатической липазой и ризолипазой.

Novel ciliate lipases for enzyme replacement during exocrine pancreatic insufficiency

AIM AND OBJECTIVES:

Exocrine pancreatic insufficiency caused by inflammation or pancreatic tumors results in nutrient malfunction by a lack of digestive enzymes and neutralization compounds. Despite satisfactory clinical results with current enzyme therapies, a normalization of fat absorption in patients is rare. An individualized therapy is required that includes high dosage of enzymatic units, usage of enteric coating, and addition of gastric proton pump inhibitors. The key goal to improve this therapy is to identify digestive enzymes with high activity and stability in the gastrointestinal tract.

METHODS:

We cloned and analyzed three novel ciliate lipases derived from Tetrahymena thermophila. Using highly precise pH-STAT-titration and colorimetric methods, we determined stability and lipolytic activity under physiological conditions in comparison with commercially available porcine and fungal digestive enzyme preparations. We measured from pH 2.0 to 9.0, with different bile salts concentrations, and substrates such as olive oil and fat derived from pig diet.

RESULTS:

Ciliate lipases CL-120, CL-130, and CL-230 showed activities up to 220-fold higher than Creon, pancreatin standard, and rizolipase Nortase within a pH range from pH 2.0 to 9.0. They are highly active in the presence of bile salts and complex pig diet substrate, and more stable after incubation in human gastric juice compared with porcine pancreatic lipase and rizolipase.